產(chǎn)品及特點(diǎn)：
變形桿菌（Proteus spp.）是人和動(dòng)物的寄生菌和病原菌，廣泛分布在自然界中，如土壤、水、垃圾、腐敗有機(jī)物及人或動(dòng)物的腸道內(nèi)。變形桿菌一般不致病。夏、秋季節(jié)溫度高，變形桿菌在被污染的食品中大量繁殖，如食用前未徹底加熱，其產(chǎn)生的可引起中毒。進(jìn)食后 2~30 小時(shí)出現(xiàn)上腹部刀絞樣痛和急性腹瀉，伴有惡心、嘔吐、發(fā)熱。病程較短，一般 1~3 天可恢復(fù)，很少有死亡。中毒食品主要以動(dòng)物性食品為主，其次為豆制品和涼拌菜，發(fā)病季節(jié)多在夏、秋，中毒原因?yàn)楸晃廴臼称吩谑秤们拔磸氐准訜幔冃螚U菌食物中毒是我國(guó)常見(jiàn)的食物中毒之一。因此快速靈敏檢測(cè)變形桿菌具有重要的意義，本試劑盒就是為此目的根據(jù) PCR 原理開(kāi)發(fā)，它具有下列特點(diǎn)：
1. 即開(kāi)即用，用戶(hù)只需要提供DNA模板。
2. 引物經(jīng)過(guò)精心優(yōu)化，專(zhuān)一性強(qiáng)，只擴(kuò)增變形桿菌屬通用，與其他病原沒(méi)有交叉反應(yīng)。
3. 提供陽(yáng)性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。
4. PCR mix 中含上樣染料，PCR后可以直接上樣電泳。
5. 本試劑盒足夠做40μL體系的PCR 50次，但只能用于科研。
規(guī)格及成分：
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編號(hào)
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成分
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規(guī)格
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試劑一
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PCR MagicMix 3.0
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1 mL（紅蓋）
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試劑二
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超純水
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1 mL（亮黃色）
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試劑三
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變形桿菌屬通用 PCR 引物混合液
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100 μL（白蓋）
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試劑四
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變形桿菌屬通用 PCR 陽(yáng)性對(duì)照（1×10E8 /μL）
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50 μL（黃蓋）
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試劑五
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使用手冊(cè)
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1 份
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運(yùn)輸及保存：
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽(yáng)性對(duì)照需要單獨(dú)放置，不要污染其他試劑。
自備試劑：
樣品 DNA。
變形桿菌屬通用PCR試劑盒
使用方法：
一、樣品 DNA 的制備：
1. 用自選方法純化N+2個(gè)樣品的DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)核酸提取試劑盒兼容?？梢赃x用本公司柱式病毒 DNAout。
2. 如果有N個(gè)樣品，則需要做N+2個(gè)提取，包括一個(gè)樣品制備陽(yáng)性對(duì)照和一個(gè)樣品制備陰性對(duì)照。樣品制備陽(yáng)性對(duì)照是在適量水（取決于試劑盒要求的樣品起始量）中加 10μL 變形桿菌屬通用 PCR 陽(yáng)性對(duì)照的 1000 倍稀釋液而得，樣品制備陰性對(duì)照是直接用水。提取結(jié)束后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)（40μL 體系）：
3. 對(duì)N+2個(gè)樣品，在PCR時(shí)需要增加一個(gè)PCR陽(yáng)性對(duì)照和一個(gè)PCR陰性對(duì)照，故需要設(shè)置N+4個(gè)反應(yīng)。在N+4個(gè)PCR管中分別加入下列成分：
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編號(hào)
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成分
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規(guī)格
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試劑一
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PCR MagicMix 3.0
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1 mL（紅蓋）
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試劑二
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超純水
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1 mL（亮黃色）
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試劑三
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變形桿菌屬通用 PCR 引物混合液
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100 μL（白蓋）
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試劑四
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變形桿菌屬通用 PCR 陽(yáng)性對(duì)照（1×10E8 /μL）
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50 μL（黃蓋）
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試劑五
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使用手冊(cè)
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1 份
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4. 按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)：
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過(guò)程
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溫度
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時(shí)間
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預(yù)變性
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95℃
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5 min
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PCR 反應(yīng)（35 個(gè)循環(huán)）
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95℃
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30 sec
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55℃
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30 sec
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72℃
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40 sec
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延伸
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72℃
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7 min
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三、電泳檢測(cè)：
5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測(cè) PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在 擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽(yáng) 性對(duì)照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn)，陰性對(duì)照必須無(wú)任何擴(kuò)增，否則實(shí) 驗(yàn)無(wú)效。對(duì)沒(méi)有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴(kuò)增以排除 PCR 抑制劑的感染。
