產(chǎn)品中心
產(chǎn)品詳情

  • 產(chǎn)品名稱： HotStart Taq DNA polymerase(含預(yù)混Mg2+的10 × Taq Buffer)

  • 產(chǎn)品型號(hào)： 500 U, 2.5 U/ul
  • 產(chǎn)品廠商：通蔚生物
  • 產(chǎn)品價(jià)格：667
  • 產(chǎn)品庫存：112
  • 產(chǎn)品文檔：
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簡單介紹：
HotStart Taq DNA polymerase(含預(yù)混Mg2+的10 × Taq Buffer)Hotstart Taq Plus DNA Polymerase 是抗 Taq 單克隆抗體修飾的熱啟動(dòng)酶，高溫加熱前，抗 Taq 單克隆抗體與 Taq 聚合酶結(jié)合從而抑制聚合酶的活性，達(dá)到抑制低溫條件下由引物的非特異性退火或引物二聚體引起的非特異性擴(kuò)增作用。當(dāng)擴(kuò)增反應(yīng)體系被加熱到95°C 2 min 時(shí)，聚合酶活性因抗 Taq 單克隆抗體變性而得到恢復(fù)，因此無需特殊失活處理，在常規(guī) PCR 反應(yīng)條件下即可使用?？蓱?yīng)用于熱啟動(dòng) PCR，擴(kuò)增復(fù)雜模板，低拷貝目的片段擴(kuò)增。
詳情介紹：
產(chǎn)品特點(diǎn)
Hotstart Taq Plus DNA Polymerase 是抗 Taq 單克隆抗體修飾的熱啟動(dòng)酶，高溫加熱前，抗 Taq 單克隆抗體與 Taq 聚合酶結(jié)合從而抑制聚合酶的活性，達(dá)到抑制低溫條件下由引物的非特異性退火或引物二聚體引起的非特異性擴(kuò)增作用。當(dāng)擴(kuò)增反應(yīng)體系被加熱到95°C 2 min 時(shí)，聚合酶活性因抗 Taq 單克隆抗體變性而得到恢復(fù)，因此無需特殊失活處理，在常規(guī) PCR 反應(yīng)條件下即可使用?？蓱?yīng)用于熱啟動(dòng) PCR，擴(kuò)增復(fù)雜模板，低拷貝目的片段擴(kuò)增。

成分規(guī)格

產(chǎn)品組成

規(guī)格

HotStart Taq DNA polymerase

250Ｕ/ 2.5U/μl

10 × Taq Buffer（含 Mg2+）

1m / 2*1 ml

-20℃，有效期 1 年

本產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于其它用途


使用方法
（注 意：以下舉例為常規(guī)PCR反應(yīng)體系和反應(yīng)條件，實(shí)際操作中應(yīng)根據(jù)模板、引物結(jié)構(gòu)和目的片段大小不同進(jìn)行相應(yīng)的調(diào)整和優(yōu)化）
1. PCR 體系：
推薦體系（50μl）

試劑

用量

模板 DNA

< 1μg

10 × Taq Buffer

5μl

dNTP Mixture(2.5 mM each)

4μl

Primer 1 (10 μM)

2μl

Primer 2 (10 μM)

2μl

Hotstart Taq DNA Polymerase (2.5 U/μl)

0.5 ~ 1μl

ddH2O

Up to50μl


注 意：
A 引物濃度請(qǐng)以終濃度 0.1-1.0μM 作為設(shè)定范圍的參考。擴(kuò)增效率不高的情況下，可提高引物的濃度；發(fā)生非特異性反應(yīng)時(shí)，可降低引物濃度，由此優(yōu)化反應(yīng)體系。
B 鎂離子濃度請(qǐng)以終濃度 1.5-3mM 作為設(shè)定范圍的參考?？筛鶕?jù)不同的引物對(duì)和模板來調(diào)節(jié)鎂離子濃度，由此優(yōu)化反應(yīng)體系）
2. PCR 程序

過程

溫度

時(shí)間

預(yù)變性

94℃

5min

25－35cycles

變性

94℃

30sec

退火

55-65℃

30sec

延伸

72℃

1kb/30sec

終延伸

72℃

5min


注 意：
a 一般實(shí)驗(yàn)中退火溫度比擴(kuò)增引物的熔解溫度 Tm 低 5℃，無法得到理想的擴(kuò)增效率時(shí)，適當(dāng)降低退火溫度；發(fā)生非特異性反應(yīng)時(shí)，提高退火溫度，由此優(yōu)化反應(yīng)條件。
b 延伸時(shí)間應(yīng)根據(jù)所擴(kuò)增片段大小設(shè)定，Hotstart Taq Plus DNA Polymerase 的擴(kuò)增效率為 1 kb/30 sec。
C 可根據(jù)擴(kuò)增產(chǎn)物的下游應(yīng)用設(shè)定循環(huán)數(shù)。如果循環(huán)次數(shù)太少，擴(kuò)增量不足；如果循環(huán)次數(shù)太多，錯(cuò)配機(jī)率會(huì)增加，非特異性背景嚴(yán)重。所以，在保證產(chǎn)物得率的前提下，應(yīng)盡量減少循環(huán)次數(shù)）
3. 結(jié)果檢測(cè)：
反應(yīng)結(jié)束后取 5 μl 反應(yīng)產(chǎn)物，加入適量上樣緩沖液后進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。
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